本試劑盒是采用豬O型口蹄疫病毒VP1基因工程表達(dá)產(chǎn)物包被微孔板，在試驗(yàn)中，加入稀釋的對(duì)照血清和待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬口蹄疫病毒VP1的特異性抗體，豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒則將與檢測(cè)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)二抗，與檢測(cè)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，加入HF溶液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀630nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的OD值。 【作用與用途】 用于檢測(cè)豬血清中口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC的抗體。用于區(qū)別口蹄疫野毒感染豬和用滅活疫苗免疫豬。 豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒【主要成分與含量】 1 包被抗原的微孔板 2塊 （96孔） 2 陰、陽性對(duì)照血清 各1管 （1ml/管） 3 羊抗豬酶標(biāo)二抗 1瓶 （20ml/瓶） 4 20倍濃縮洗滌液 1瓶 （30ml/瓶） 5 底物A液、B液 各1瓶 （10ml/瓶） 6 終止液 1瓶 （10ml/瓶） 7 樣品稀釋液 2瓶 （50ml/瓶） 8 血清稀釋板 2塊 （96孔/板） 9 說明書 一張 【樣品制備】 取動(dòng)物全血，豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。 【洗滌液配制】 使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右）,并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解（在37℃水中加熱5-10min），然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋（例如：用20 ml濃縮液加上380ml水），稀釋好的洗滌液在4℃可以存放7天。豬O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒 【樣品稀釋】 待檢血清1：40稀釋：具體為在血清稀釋板中按1：40稀釋待檢血清（195μl樣品稀釋液中加5μl待檢血清，混勻即可）。 注意：陽性對(duì)照和陰性對(duì)照1：4稀釋（180μl樣品稀釋液中加60μl對(duì)照血清）。 【注意事項(xiàng)】 1 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，使用后放回2-7℃。 2 不同批號(hào)試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時(shí)應(yīng)防止試劑污染。 3 不要用口移液。 4 TMB（底物液B）不要暴露于強(qiáng)光和避免接觸氧化劑，底物液A、底物液B、終止液不許使用移液器。 5 微孔板拆封后避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，應(yīng)盡快置于4℃)。 6 待檢血清樣品數(shù)量較多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板稀釋完所有要檢測(cè)血清，再將稀釋好的血清轉(zhuǎn)移到檢測(cè)板，使反應(yīng)時(shí)間一致。 7 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。 8 嚴(yán)格按照操作說明書可以獲得的結(jié)果，操作過程中移液，定時(shí)和洗滌等的全過程必須。 【用法與判定】 1 取檢測(cè)板（根據(jù)樣品多少可拆開分次使用），用稀釋好的洗滌液洗板2次（200μl/孔）靜置2分鐘后在干凈吸水紙上拍干。 2 取稀釋好的待檢樣品100μl加入到檢測(cè)板中；陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100μl；輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置37℃溫育30分鐘。 3 甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，200μl/孔，每次靜置3分鐘倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。 4 每孔加酶標(biāo)二抗（抗豬IgG-HRP結(jié)合物）100μl，置37℃溫育30分鐘。 5 洗滌5次, 方法同2。切記每次在干凈吸水紙上拍干。 6 每孔先加底物液A一滴（50μl）、再加底物液B一滴（50μl），混勻，室溫(18℃-25℃)避光顯色10分鐘。 7 每孔加終止液1滴(50μl)，10分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果（檢測(cè)前在震蕩器上輕輕震動(dòng)一下）。 8 判定 在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD630nm值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔的OD630nm值均≥0.8陰性對(duì)照孔的平均OD630nm值均＜0.3。 樣品OD630nm值≥0.4時(shí)判為陽性；樣品OD630nm值＜0.4時(shí)判為陰性。 注意：用620 ~650納米波長測(cè)定結(jié)果均有效。  間接血凝試驗(yàn)（HIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）結(jié)果對(duì)比分析 間接血凝試驗(yàn)（HIA） 小于1：128 1：128～1：256 1：512～1：2048 大于1：2048 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 小于0.40 0.40～0.70 0.70～1.20 大于1.20 注：以上結(jié)果僅供參考。 【貯存】 2-8℃避光保存 【有效期】6個(gè)月