LightScanner 32 (LS32)由美國Idaho公司生產(chǎn)，是同時具有高分辨率溶解曲線和定量PCR雙重功能的分析系統(tǒng)，是目前世界上快速的實時定量PCR儀器。它采用空氣熱循環(huán)技術(shù)，可以自動對目的核酸進行分析。 LightScanner 32 每次可以分析 32 個樣品，并且所需的時間不超過 60 分鐘。

LS32 儀器是三色實時熒光定量檢測和高分辨率熔解曲線分析功能的整合。通過采用一系列標記的探針如 SimpleProbes, FRET probes 和 HybProbe ，儀器可以用來進行實時定量 PCR ，當采用 LCGreen Plus 染料時，儀器可以產(chǎn)生理想的高分辨率的熔解曲線用來分析。

該系統(tǒng)包括計算機控制，并且在電腦上已經(jīng)預(yù)先安裝好了便于操作和分析的軟件。該軟件可以自動的收集和解釋數(shù)據(jù)，并且將分析好的結(jié)果以的形式產(chǎn)生。

溫度控制

LS32 的溫度控制由處在循環(huán)室內(nèi)的溫度傳感器來控制調(diào)節(jié)。周圍環(huán)境的空氣由進氣風(fēng)扇吸入，產(chǎn)生正壓力后，使得空氣通過加熱管道進入反應(yīng)室內(nèi)?？諝庠诩訜峁艿赖哪┒擞杉訜峋磉M行加熱，然后由第二個風(fēng)扇將空氣分散在小室內(nèi)。冷卻過程以同樣的方式進行——將未被加熱的空氣抽入到小室中來冷卻樣品。

這種方法是目前為止世界上迅速的改變 PCR 反應(yīng)溫度的方法，使得 PCR 反應(yīng)可以在 15 至 20 分鐘之內(nèi)完成。

熒光計的組成

一個三通道的熒光計模塊用于實時檢測每個擴增反應(yīng)過程中的染料或者探針。熒光計中的三個通道可以同時讀取并記錄每個樣品中所獲得的熒光。每個樣品的激發(fā)是由一個 LED 發(fā)射的光通過調(diào)諧后的濾光器，由二向色鏡產(chǎn)生的 470 nm 處的波長激發(fā)的。三種檢測通道也都是經(jīng)過濾光器的，產(chǎn)生波長分別為 530 nm, 640 nm, 和 710 nm 的光波

為了激發(fā)熒光，每個儀器都配備有一個 LED 光源。這種 LED 光源不需要維護并且有相當長的壽命。熒光計有三個通道，可以檢測波長變化的發(fā)射光。 由于高質(zhì)量的光學(xué)性能，使得測量變得非常的迅速和靈敏。在普通的擴增過程中，對于一個樣品的測量一般只需要 20 毫秒。

高分辨率熔解曲線分析

LightScanner32熒光定量PCR集成了美國Idaho公司先進的高分辨溶解曲線功能（HRM），在染料 LCGreen Plus 的幫助下，高分辨率熔解曲線分析可以鑒別出 PCR 產(chǎn)物中雜合的單堿基突變。這種方法比起普通的技術(shù)來說有更好的靈敏性和特異性。采用這種方法進行的突變的檢測不依賴于突變在片段中所在的位置。當片段的大小在 400 bp 或者更小時，靈敏性。

除了能鑒定出未知的雜合突變，高分辨率熔解曲線還可以被用來鑒定特定位點的突變，在這種情況下，掃描未知突變和進行基因分型可以結(jié)合在一起，使得分析更為簡單。對于目前絕大多數(shù)的突變分析方法來說，都很難鑒定出純合子序列突變。在一些不同種類的小的擴增片段中，高分辨率熔解曲線則顯示出了鑒定純合子序列突變的能力。這種方法能鑒定出大多數(shù)的純合突變，但不能保證可以鑒定出所有的純合突變。

在 LS32 系統(tǒng)中，高分辨率熔解曲線分析是在完成 PCR 反應(yīng)之后開始的。溫度控制的熔解發(fā)生器在樣品下方，通過一種被保護的方式上升到毛細管處，然后對 PCR 產(chǎn)物進行熱變性。同時也自動收集高密度的熒光數(shù)據(jù)。

當達到目標變性溫度以后，熔解發(fā)生器會下降從而和樣品分離，同時由高速風(fēng)扇對其降溫。該過程不斷的重復(fù)直到所有的樣品都被熔解。然后加熱裝置下降，啟動冷卻過程，隨后移動到另一個毛細管處

LS32 有為卓越的控溫能力和數(shù)據(jù)采集速度。 LS32 極好的靈敏度和特異性幾乎可以滿足所有掃描未知突變和進行基因分型的工作。