微囊藻毒素酶聯(lián)免疫試劑盒

(貨號(hào)：OunuoAT91001)

一、原理
  微囊藻毒素酶聯(lián)免疫試劑盒，采用間接競(jìng)爭(zhēng)法。酶標(biāo)板微孔中預(yù)包被microcystin抗原，樣品中殘留的microcystin與微孔板上的抗原競(jìng)爭(zhēng)microcystin抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB顯色，吸光值與樣品中microcystin含量成負(fù)相關(guān)。

二、酶聯(lián)免疫分析程序
1. 測(cè)定之前注意事項(xiàng)
1) 使用前將所有試劑平衡至室溫（20-25℃）。
2) 使用后迅速將試劑放入2-8℃冷藏。
3) 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序的要點(diǎn)。
4) 所有孵育過程應(yīng)避免陽光直射，并按要求用蓋板覆蓋住酶標(biāo)板。
2. 溶液的配制
1) 洗滌液的配制：將濃縮洗滌液用去離子水稀釋10倍后使用（1份濃縮洗滌液加9份蒸餾水）。
3. 測(cè)定程序
1) 將足夠標(biāo)準(zhǔn)品和樣品所用數(shù)量的孔條插入酶標(biāo)板架，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，記錄下標(biāo)準(zhǔn)和樣品的位置。未使用的酶標(biāo)板用鋁箔袋封好置2-8℃冷藏保存。
2) 分別吸取50μL 標(biāo)準(zhǔn)品和樣品加至相應(yīng)的微孔（雙孔）中，然后各加入50μL微囊藻毒素抗體加蓋，室溫溫育30分鐘（每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭）。
3) 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體，然后每孔加入250μL 稀釋好的洗滌液洗滌，振蕩后倒出孔中的液體，拍干；重復(fù)操作四次，洗板時(shí)每次間隔30秒，洗完后用力在吸水紙上拍干。
4) 加入100μL酶標(biāo)二抗抗體加蓋，室溫溫育30分鐘（每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭）。
5) 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體，然后每孔加入250μL 稀釋好的洗滌液洗滌，振蕩后倒出孔中的液體，拍干；重復(fù)操作四次，洗板時(shí)每次間隔30秒，洗完后用力在吸水紙上拍干。
6) 每孔加入100μL底物， 室溫避光溫育10分鐘。
7) 每孔加入50μL終止液，混勻。
8) 置于酶標(biāo)儀中，振蕩混勻，在450nm處測(cè)定吸光度值（OD值），參比波長(zhǎng)630nm。（iELisa全自動(dòng)酶標(biāo)儀可以直接讀出、打印濃度值）。
三、  結(jié)果判定（微囊藻毒素試劑盒）
1. 所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B₀）再乘以100%，即百分吸光度值。 以微囊藻毒素準(zhǔn)品濃度值（ppb）為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。相對(duì)應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。也可以用回歸方程法，計(jì)算出樣本溶液濃度。利用計(jì)算機(jī)專業(yè)軟件，更便于大量樣品的快速分析。

2. 樣品的實(shí)際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
3. 如果測(cè)定值超出檢測(cè)范圍，樣品提取溶液按一定的比例用稀釋緩沖液進(jìn)行稀釋。
四、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度（微囊藻毒素試劑盒）
1. 精密度:批內(nèi)變異系數(shù)<10%（n=10），批間變異系數(shù)<25%(n=10)。
2. 靈敏度：0.075ng/mL。
3. 樣本檢測(cè)線：
飲用水、地表水........................................0.075ng/mL
海水          ..........................................0.75ng/mL
4. 準(zhǔn)確度:
飲用水、地表水 .......................................90%±25%
海水 ........................................................ 90%±25%