一、 原理  本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的己烯雌酚，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行的，樣本中的己烯雌酚和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚的抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的己烯雌酚含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出己烯雌酚含量。 二、 試劑盒技術(shù)指標(biāo)：試劑盒靈敏度：          0.1ppb樣本檢測下限：組織（蝦、魚）           0.1ppb豬肉/肝 雞肉/肝            2ppb飼料                      20ppb尿液                      0.6ppb回收率：飼料                      90±10%組織                      85±10%尿液                      80±10%交叉反應(yīng)率：己烯雌酚                  100%雙烯雌酚                  35%己烷雌酚                  10%己炔雌二醇                <0.1%雌三醇                    <0.1% 三、試劑盒組成1．酶標(biāo)板：96T/8孔2．標(biāo)準(zhǔn)品液： 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb（1.0mL/瓶）3．酶標(biāo)記物            12mL4．抗體工作液          7mL5．底物緩沖液          7 mL6．底物液              7 mL7．終止液              7 mL8．20倍濃縮洗滌液     50 mL     用去離子水稀釋到1000 mL9．20倍濃縮復(fù)溶液     12mL     用去離子水稀釋到240 mL 四、樣本前處理步驟樣本處理前須知：1．實(shí)驗(yàn)中必須使用性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。2．實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本前處理需配制：配液1：6M H₃PO₄   100mL   濃H₃PO₄（含量85%） 加去離子水150mL混合均勻配液2：1M NaOH    4g      NaOH     加去離子水100mL溶解配液3：2M NaOH    8g        NaOH   加去離子水100mL溶解配液4：乙腈-丙酮    80mL      乙腈    加入丙酮20mL混合均勻 樣本的處理：（a）飼料樣本1．稱取2±0.05g搗粹后的飼料樣本，加入8mL乙腈，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min；2．取2mL上清液，60℃氮?dú)?空氣吹干；3．加入0.5mL氯仿，渦動(dòng)20s，加入2mL 1M NaOH，渦動(dòng)30s，3000g以上，離心5min；4．取1mL上清液，加入100μL 6M H3PO4，渦動(dòng)5s； 不同樣本按如下方法稀釋：配合料：取50μL，加入950μL的復(fù)溶液，渦動(dòng)混勻，取50μL /孔用于檢測。濃縮料/預(yù)混料：取25μL，加入975μL復(fù)溶液，渦動(dòng)混勻，取50μL /孔用于檢測。取50μL用于分析。配合料稀釋倍數(shù)：100       濃縮料、預(yù)混料稀釋倍數(shù)：200  （b）組織（雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚）1．稱取2±0.05g勻漿后的樣本，加入6mL乙腈-丙酮，振搖10min，15℃，3000g以上，離心10min。2．取3mL上清液，60℃氮?dú)?空氣吹干。加入0.5mL氯仿，渦動(dòng)20s，加入2mL 2M NaOH，渦動(dòng)30s，3000g以上，離心5min。3．取1mL上清液，加入200μL 6M H3PO4，渦動(dòng)5s。4．加入3mL乙腈萃取，振蕩10min，室溫3000g以上，離心10min，取上層有機(jī)相， 60℃氮?dú)?空氣吹干。用1mL復(fù)溶液溶解干燥的殘留物。 不同樣本按如下方法稀釋：蝦魚：直接取50μL水相用于檢測。稀釋倍數(shù)：2豬肉/肝、雞肉/肝：取50μL水相加入450μL稀釋后的復(fù)溶液，渦動(dòng)均勻；取50μL用于檢測。稀釋倍數(shù)：20（c）尿液1．取2mL尿液到離心管中，室溫3000g以上，離心10min，直至清亮；2．移取1mL清亮尿液至離心管中，加入1mL　1M NaOH強(qiáng)烈振蕩5min；3．加入100μL  6M H3PO4，渦動(dòng)30 s；4．再加入8mL氯仿進(jìn)行萃取，振蕩10min。15℃，3000g以上，離心10min；5．去掉上層的水相，取下層有機(jī)相4 mL，60℃氮?dú)?空氣吹干；6．用3mL稀釋后的復(fù)溶液干燥的殘留物；取50μL 用于分析。樣本稀釋倍數(shù)：6